清平镖局因保护陈圆圆而全军覆没，大当家杨六安与陈圆圆下落不明，江湖烽烟四起，杨六安一家也不得不藏身于山野，为不让外人猜疑六安只得接受与父亲的养女锁儿成为夫妻。造化弄人，六安为救兄弟马自骑而夺了花魁，惹上了名妓关赛赛。却因被关赛赛逼得不敢归家恰巧躲过崇善的灭门屠杀，锁儿失 踪，六安誓要手刃凶手救回锁儿报仇血恨。不想身份暴露，被崇善一路追杀，却又被动卷入搜寻陈圆圆的纷争之中。镖局虽然不在了，但陈圆圆可是自己心中的镖，亲情、诚信、爱情究竟该如何坚守…

王振威（周群达 饰）的父亲王兆兴（姜大卫 饰）曾经是名震江湖的镖师，如今已经归隐田园的他只想要过平静的生活。然而，王振威却并不赞同父亲的想法，心高气傲的他只想着能够成就一番大事业，因此同父亲之间屡次争吵。 王振威孤身一人来到京城，开办了天下镖局，却因为初来乍到，而遭到了各路同行的刁难，更于无意之中得罪的千金大小姐沈飞燕（吴晓敏 饰）。为了作弄王振威，沈飞燕将一个无足轻重的香囊交付给他，命他送往保定，就这样，王振威踏上了旅途。哪知道这一个小小的香囊竟然让王振威和沈飞燕惹上了杀身之祸，其中究竟隐藏了什么秘密呢？

王振威（周群达饰）的父亲王兆兴（姜大卫饰）曾经是名震江湖的镖师，如今已经归隐田园的他只想要过平静的生活。然而，王振威却并不赞同父亲的想法，心高气傲的他只想着能够成就一番大事业，因此同父亲之间屡次争吵。王振威孤身一人来到京城，开办了天下镖局，却因为初来乍到，而遭到了各路同行的刁难，更于无意之中得罪的千金大小姐沈飞燕（吴晓敏饰）。为了作弄王振威，沈飞燕将一个无足轻重的香囊交付给他，命他送往保定，就这样，王振威踏上了旅途。哪知道这一个小小的香囊竟然让王振威和沈飞燕惹上了杀身之祸，其中究竟隐藏了什么秘密呢？

冯金（王岗饰）来到了天下镖局，花重金聘请王振威（周群达饰）保镖，而他需要保护的人正是冯金的干女儿沈飞燕（吴晓敏饰）。沈飞燕的父亲沈荣（姬麒麟饰）发现王振威所使出的招式正是他苦苦追寻了几十年的“霸王追魂枪”，于是邀请王振威的父亲王兆兴（姜大卫饰）来府上一聚。哪知道两人之前有着牵扯不清的恩恩怨怨，一言不合竟然相约在十里坡比试武艺。比武当日，沈荣倒在了王兆兴的追魂枪下，而令王兆兴感到疑惑的是，自己的枪并未此中沈荣，这也就意味着有人从中作梗，借刀杀人。王振威掩护父亲离开，自己却缴械投降，因为他深信为人正直的父亲不可能干出此事，王振威被投入了大牢，所幸得到沈飞燕的搭救重获自由，就此展开了对于事件真相的调查。

“神州镖局”老板侯天彪欲称霸京城镖行，将“天下镖局”视为眼中钉。此时，恰好官府张贴出榜文召开夺镖大会，最终获胜的镖局可以负责押运一年的皇杠。于是，“神州镖局”设法打压各家报名参加大会的镖局，小王带头与之作对，双方就此结仇。这时，与飞燕青梅竹马的李云聪忽然出现，搅得小王心神不安，而李云聪偏偏是这次夺镖大会的监擂官。侯天彪带人到“天下镖局”踢馆，老王被铁掌李打伤，又牵出一段沉积多年的恩怨。就在侯天彪阴谋即将得逞之际，小王终于挺身而出与“神州镖局”订立“生死状”，誓言为京城镖行清除败类。风起云涌的夺镖大会上，小王一路过关斩将，在身负重伤的情况下艰难击败铁掌李，小王和“天下镖局”一举扬名，而作恶多端的侯天彪也受到了应有的惩罚。

“神州镖局”老板侯天彪欲称霸京城镖行，将“天下镖局”视为眼中钉。此时，恰好官府张贴出榜文召开夺镖大会，最终获胜的镖局可以负责押运一年的皇杠。于是，“神州镖局”设法打压各家报名参加大会的镖局，小王带头与之作对，双方就此结仇。这时，与飞燕青梅竹马的李云聪忽然出现，搅得小王心神不安，而李云聪偏偏是这次夺镖大会的监擂官。侯天彪带人到“天下镖局”踢馆，老王被铁掌李打伤，又牵出一段沉积多年的恩怨。就在侯天彪阴谋即将得逞之际，小王终于挺身而出与“神州镖局”订立“生死状”，誓言为京城镖行清除败类。风起云涌的夺镖大会上，小王一路过关斩将，在身负重伤的情况下艰难击败铁掌李，小王和“天下镖局”一举扬名，而作恶多端的侯天彪也受到了应有的惩罚。

王兆兴已和谷平安过上了甜美安逸的日子，但突然王兆兴收到了龙骑禁军的召唤。为救义父“车千户”，王兆兴又拿起了大枪重新加入锦衣卫。没想到在执行任务过程中龙骑禁军全军覆没，只留下王兆兴一人逃出虎口。更令人意想不到的是王兆兴回到家中，却发现……

环境恶化导致了自然灾变，原有的世界秩序陷入混乱。贺将年少时便跟随父亲贺长风在新萨科城开卡车谋生，东邦流民在优人恐怖组织的压迫下艰难生存，忍无可忍之下，她决定带领乔七、刘战等东邦人兄弟一起奋力反抗。

“捣练图”是唐代名画中的极品，一个偶然机会这幅流散民间多年的国宝落在了管青山（佟小虎 饰）手上，这下可让觊觎它已久的各路人马算计起来。江湖大盗九尾狐差人送信指名盗宝，而管青山则要在两日后的“赏画大会”后将此画尽快出手，因怕夜长梦多，他想请天下镖局护镖。飞燕（吴晓敏 饰）认为此镖风险太大，不敢冒然应允，可王振威（周群达 饰）禁不住此镖利润巨大，决意护镖，双方立下字据，镖额五十万两。王兆兴（姜大卫 饰）闻言九尾狐要盗此宝，善意提醒飞燕和王振威，并在管府布下天罗地网，以防不测，且发现管的女儿金凤（董丽丹 饰）举止有些异样。这时，管青山借故推迟一天开赏画大会，王兆兴心中生疑，他暗中监视管青山的行踪，不料发现了管青山的惊天秘密……

《天下第一镖局》讲述的故事发生在清康熙年间，吴三桂驾崩之后，大将马宝为了将陈圆圆和其孙子护送归隐，开始寻求江湖势力保护，天下第一镖局——清平镖局意外担此重任，并经历了与多方势力的殊死混战，最终九死一生。